寡核苷酸可以通過硫醇-馬來酰亞胺和腙偶聯(lián)方法與抗體/蛋白質偶聯(lián)。硫醇-馬來酰亞胺方法通常使用雙功能接頭（例如 SMCC）進行。然而，SMCC修飾的蛋白質極不穩(wěn)定，并且經常自反應，因為它通常含有胺和硫醇基團，導致大量的同源交聯(lián)。當存在其他硫醇基團時，共軛鍵可交換。在腙偶聯(lián)方法中，共軛反應基于肼和醛之間的反應。盡管使用了催化劑，但這種方法的收率很低。分子的大小和官能團的不可接近性導致產量低。此外，聯(lián)動穩(wěn)定性也是一個問題。

BroadPharm的MagicLink™技術通過結合PEG和專有的交聯(lián)化學解決了所有問題。MagicLink™ 化學試劑盒和試劑盒根本不需要 TCEP、DTT 或催化劑！

首先，抗體與LINK NHS酯反應，將LINK引入抗體中。此外，胺修飾的寡核苷酸與MAGIC NHS酯反應，將MAGIC引入寡核苷酸結構中。其次，在純化活化后的寡核苷酸和抗體后，它們立即相互反應，產生具有穩(wěn)定環(huán)連接的抗體-寡核苷酸偶聯(lián)物。

原理示意圖：

注意事項：

1.單鏈寡核苷酸的堿基長度是10-120個之間

2.雙鏈寡核苷酸的堿基長度是80個以內

3.寡核苷酸探針在合成時需要修飾，合成時備注好

4.待偶聯(lián)抗體或者蛋白的保存在PBS里面，濃度不低于1mg/ml。一般1-10mg/ml均可

5.活化后的寡核苷酸和活化后的抗體都要盡快使用，不要超過2小時

產品使用已發(fā)表文獻：

1.McMahon NP, Jones JA, Kwon S, et al. Oligonucleotide conjugated antibodies permit highly multiplexed immunofluorescence for future use in clinical histopathology. J Biomed Opt. 2020;25(5):1-18. doi:10.1117/1.JBO.25.5.056004

2.Wiener, J., Kokotek, D., Rosowski, S. et al. Preparation of single- and double-oligonucleotide antibody conjugates and their application for protein analytics. Sci Rep 10, 1457 (2020). doi.org/10.1038/s41598-020-58238-6