Prostate cancer 前列腺癌 （PC） 。轉移性去勢抵抗性 PC （mCRPC） 是 PC 的最后階段，它對雄激素剝奪療法 （ADT） 產生耐藥性，占 PC 相關死亡的 90% 以上。恩雜魯胺是第二代小分子雄激素受體 （AR） 拮抗劑，是顯著提高 mCRPC 患者生存率的現(xiàn)代抗雄激素藥物之一。
基質細胞形成的腫瘤微環(huán)境提供外源信號以誘導癌癥治療反應，這通常會導致腫瘤細胞的遺傳和表觀遺傳改變的積累。與原發(fā)性腫瘤相比，轉移靶向器官在基質細胞、細胞外基質 （ECM） 和細胞因子環(huán)境方面具有不同的組織環(huán)境 。以前的研究表明，原發(fā)腫瘤和轉移對化療的反應之間存在明顯差異，這表明癌癥治療耐藥性中涉及轉移微環(huán)境機制。事實上，最近的單細胞轉錄組學研究支持了這一點，該研究表明，在恩雜魯胺治療后，在患者轉移性 PC 中觀察到基因表達變化而不是特異性耐藥克隆的選擇。這表明轉移微環(huán)境可能驅動這些基因表達變化。然而，絕大多數(shù)先前的體內轉移性 PC 模型 （例如，PC3、C4-2B） 通過腫瘤細胞內在機制對抗雄激素產生耐藥性。因此，盡管這些模型可用于研究促進轉移的宿主因素，但它們不能用于確定促進抗雄激素耐藥的微環(huán)境因素。轉移性微環(huán)境誘導的抗雄激素耐藥的機制基礎和關鍵的基質細胞類型在很大程度上是未知的。
骨轉移性 PC 占所有轉移性病例的 70% 以上，并且與晚期 PC 患者的死亡高度相關。在目前的研究中，我們確定巨噬細胞是骨轉移性 PC 中顯著富集的關鍵基質細胞類型，與原發(fā)性腫瘤和其他器官的轉移相比。使用新開發(fā)的雄激素依賴性骨轉移性 PC 體內模型，該模型可以區(qū)分抗雄激素耐藥和轉移的過程，我們的數(shù)據(jù)揭示了 PC 細胞中巨噬細胞誘導傷口愈合樣反應的新機制，ECM 和受體基因顯著上調。我們的研究確定了巨噬細胞衍生的激活素 A 通過上調纖連蛋白 （FN1）-整合素 α 5 （ITGA5） 和酪氨酸激酶 Src （SRC） 信號級聯(lián)反應誘導恩雜魯胺耐藥的重要性 PC 細胞。患者轉錄組數(shù)據(jù)集中這些關鍵分子機制之間的強相關性以及與抗雄激素耐藥和患者生存率的顯著關聯(lián)進一步支持了這一點。此外，使用新型特異性抑制劑的巨噬細胞耗竭（Clodronate Liposomes，Liposoma）或 SRC 抑制顯著阻礙了骨骼中耐藥 PC 的生長?？偟膩碚f，我們的研究結果闡明了巨噬細胞誘導的傷口愈合反應與轉移性疾病中抗雄激素耐藥之間的新機制聯(lián)系，并提出了新的治療方法。
選擇合適的Marker，定義感興趣的巨噬細胞群體，尤其是定義一群新的功能的巨噬細胞群體。Marker的使用和發(fā)現(xiàn)至關重要。這也是將來發(fā)好的文獻和原創(chuàng)研究重要工作。Iba1 已廣泛用于大多數(shù)巨噬細胞群的染色，肺泡巨噬細胞除外。本研究中，Iba1與模型中的經典巨噬細胞標志物 F4/80 共定位。
(H) Macrophage depletion by L-Clod inhibits the development of enzalutamide resistance of PC bone metastasis. Representative images of Iba1 whole-mount staining of bone metastasis samples collected on day 18 with indicated treatment.
(I) FACS quantification of percentage of F4/80+ macrophages in total CD45+ cells of bone metastasis samples collected on day 18 with indicated treatment.
(J) Representative BLI of mice from H on day 0 and day 18.
Vehicle and enzalutamide (30 mg/kg body weight), SRC inhibitor eCF506 (20 mg/kg body weight) was given via daily oral gavage; L-Clod/PBS (1 mg/mouse, twice a week) were administered by i.v. injection; DT or control Glu52-DT (25 μg/kg body weight, every other day), anti-Ly-6G depleting Abs (200 μg/mouse, every other day), activin-A receptor inhibitor SB-505124 (5 mg/kg body weight, every other day) were delivered by i.p. injection. In some experiments, mice continuously received doxycycline diet (625 mg/kg). Enzalutamide was synthesized by chemical core at Memorial Sloan Kettering Cancer Center; eCF506 was kindly provided by A. Unciti-Broceta; L-Clod/PBS was from Liposoma; anti-Ly-6G Abs (clone #1A8) were from BioxCell; activin-A receptor inhibitor SB-505124 was from Selleckchem; and DT/Glu52-DT was from Sigma-Aldrich.
注射方式：靜脈注射
劑量：200ul，濃度是5mg/ml，也就是1mg
多次給藥：是
次數(shù)：6次
時相：根據(jù)模型發(fā)走發(fā)展特點，早期三次，Day0，Day4，Day7。晚期三次，Day11，Day14，Day18。對于慢性模型，需要多次注射，如果有模型里面巨噬細胞的時間曲線圖，比如數(shù)量，功能等評估巨噬細胞的。我們可以精確給藥。如果沒有，建議多參考文獻。
(H) Gating strategy for identification of F4/80+ macrophages, CCR2+ Inflam-Monos, and neutrophils in bone metastasis.
(I) Representative flow cytometry dot plots showing macrophage depletion using liposomal clodronate, shown as the percentage of F4/80+ cells (gated cells) in CD45+ total cells.
對于marker選擇，非常重要。比如CD11b，我們需要根據(jù)部位，樣品類型等因素來使用。比如正常肺臟巨噬細胞，我們就選擇CD11c。對于腫瘤樣品，我們一般加上CD11b。正常巨噬細胞的異質性，以及腫瘤巨噬細胞TAM的高度異質性，讓我們看文獻需要多思考。不能照貓畫虎。
